《Hybrid paper/PDMS microfluidic device integrated with RNA extraction and recombinase polymerase amplification for detection of norovirus in foods》

期刊名称：《Applied and Environmental Microbiology》

影响因子：3.9

研究团队：麦吉尔大学戴维斯夫人研究所病毒性疾病中心

诺如病毒（(HuNoV)）属于杯状病毒科，可通过受污染的食物传播，是引起急性胃肠炎的主要原因。

实验方法

纤维素纸条吸收了MNV-1 RNA，随后将其释放到MIRA试剂中，RNA首先被逆转录成互补DNA（cDNA），然后扩增成双链DNA（dsDNA），接着探针与目标序列进行了特异性的结合，碱性四氢呋喃（THF）残基被内切酶IV裂解，使链被聚合酶延伸。扩增子被捕获，在T线上产生视觉信号。

实验开发成果

课题组开发了一种折叠的纸/PDMS微流控装置，该装置结合了核酸提取、等温核酸扩增、可视化检测多种功能，可以无缝集成从样品制备到MNV-1的终点检测。

该微流控装置在35 min范围内完成检测，检测限均为200 PFU/mL。并且每个微流控设备的成本计算为6.76美元，为课题组目前已知的所有检测方法中最便宜的。

实验价值

课题组进一步评估了这种微流控装置在莴苣和覆盆子中检测MNV-1的性能，将粗MNV-1 RNA提取物引入新鲜农产品样品中，不需要复杂的病毒RNA浓度和纯化步骤，在生菜中检测到170 PFU/g、在树莓中检测到230 PFU/g。

而传统的检测食品中病毒的分子分析方法，如PCR和qPCR需要高纯度的病毒颗粒，这使病毒从食品基质中的洗脱、浓度和纯化变得复杂。并且传统方法需要复杂、笨重和昂贵的设备，不适合在资源有限的环境中使用。

该装置在快速检测食品供应链中的HuNoV和其他食源性病毒方面具有重要价值。