急性呼吸道感染是儿童常见的呼吸道疾病，通常由病毒引起。呼吸道合胞病毒（RSV）和呼吸道腺病毒（ADV）是引起儿童急性呼吸道感染的两种常见病原体。轻度者可引起常见的感冒症状，如咳嗽和流鼻涕，而严重者可出现严重的并发症，如肺炎和中耳炎。根据世界卫生组织的建议，病原体的检测需要具备快速、准确、敏感、特异性的特点，不应依赖专门的技术人员或大型仪器。因此，开发一种能够满足上述检测要求的RSV和ADV的检测方法尤为重要。

深圳儿童医院儿科研究所的马东礼主任课题组在《Scientific Reports》期刊上发表文章《A multiplex recombinase polymerase amplification assay combined with CRISPR/ Cas12a for the detection of respiratory syncytial virus and respiratory adenovirus》，影响因子4.6。

研究概述

将多酶恒温快速核酸扩增技术MIRA与CRISPR/Cas检测系统相结合。通过设计MIRA引物和CRISPR rna（crRNAs），多序列比较，优化反应条件，并使用荧光数值检测装置，验证灵敏度和特异性。

并且以qPCR结果作为比较对照，研究了160例临床咽拭子样本的检测结果的一致性。

（MIRA-CRISPR/Cas12a检测法检测步骤示意图）

实验结果

1. MIRA-CRISPR/Cas12a检测方法灵敏度和特异性

在MIRA方法检测中，使用RSV-F1/R1引物对从RSV、ADV、PIV、RhV、MP、CP、FluB、hMPV、FluA或RSV/ADV合并感染患者的咽拭子样本中扩增核酸。除RSV和ADV有扩增条带，其他结果均为阴性，说明所选MIRA引物与检测的其他8种病原体未发生交叉反应，且保守性良好。

随后，使用无菌水对RSV和ADV重组质粒进行10倍梯度稀释，对RSV和ADV的检测限均为106copies/mL。

（1-10：分别为RSV、RSV/ADV合并感染患者咽拭子样本以及其他呼吸道病原体样本）

（1-6：10⁷至10²稀释质粒DNA；7：阴性对照）

2.与qPCR做对比

与qPCR方法相比，RSV和ADV的检出限均为10³copies/mL。

（qPCR检测RSV和ADV的灵敏度）

       MIRA-CRISPR方法更适合基层实验室，检测时间短，操作简单，无需大型qPCR仪器即可完成实验操作。

3.临床样本对比

从急性呼吸道感染的儿童中采集咽拭子样本160例。同时使用MIRA-CRISPR方法、qPCR方法进行检测，并将结果与临床试验结果进行比较。

与qPCR方法相比，MIRA-CRISPR方法对RSV和ADV的敏感性分别为98.1%和91.4%，检测特异性均为100%。Kappa值大于0.95，表明其一致性程度较高。

MIRA-CRISPR方法对RSV和ADV的检测具备快速、灵敏、特异性强的优势。它能及时准确地检测到病毒感染，更加适合于医疗资源匮乏的地区使用。

（上述数据等信息均来源于原文，链接：http://www.shzcfeed.com/vip_doc/28304219.html）