畜牧业是全球农业生产的重要组成部分，其中猪、牛、羊的养殖尤为关键。随着养殖规模的扩大,动物疫病的传播和防控已成为影响产业效益的核心问题。传统的病原体检测方法虽然有效，但普遍面临检测速度慢、成本高、设备要求复杂等挑战，无法在养殖场或偏远地区及时响应。 随着生物技术的发展，MIRA技术（多酶恒温快速核酸扩增技术）成为疫病防控的有力工具，为养殖场提供了高效、准确的解决方案。

猪作为全球重要的畜牧动物之一，面临多种病毒、细菌的威胁，尤其是非洲猪瘟(ASF)近年来对全球养猪业造成了巨大影响。以下是几种重要的猪病原体：

-猪瘟病毒(CSFV)：高度传染的病毒性疾病,影响全球养猪业。猪瘟疫苗的广泛使用有所缓解,但持续监控是关键。

-非洲猪瘟病毒(ASFV)：近年来，ASFV的爆发给全球养猪业带来了毁灭性的打击。由于目前尚无有效疫苗，早期快速诊断显得尤为重要。 

-猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)：引发母猪流产和仔猪呼吸道症状，广泛存在于养猪场中，防控挑战大。

-猪圆环病毒(PCV)：广泛存在，PCV-Ⅱ严重引起免疫抑制，对养猪场的生产效率有重大影响。 

牛作为乳制品和肉类的主要来源，其健康直接关系到畜牧业的产出与效益。以下是常见的牛病原体: 

-牛病毒性腹泻病毒(BVDV)：影响牛的繁殖和免疫功能，感染率高，潜在的经济损失巨大。

-布鲁氏菌(Brucella spp.)：可感染多种动物，引发繁殖问题并具有公共卫生风险，跨物种传播对畜牧业造成威胁。

-牛结核病(Bovine Tuberculosis)：传染性强，涉及人畜共患，且在牛群中的潜伏期长，防控极具挑战性。

羊群健康是肉羊、奶羊生产的基础，常见的病原体包括: 

-小反刍兽疫病毒(PPRV)：影响羊和山羊的高度致命性病毒，广泛传播于非洲和亚洲地区，疫苗普及率不均衡。

-羊支原体肺炎(Mycoplasma pneumonia)：引发呼吸道疾病，影响羊群的生产效益。

-布鲁氏菌(Brucella spp.)：同样在羊中具有传播风险，影响繁殖能力，并对公共卫生构成威胁。 

传统的病原体检测方法如PCR(聚合酶链式反应)，需要专业设备和技术支持，虽然检测灵敏度和特异性较高, 但其局限性显而易见； 

-时间耗费长：传统PCR检测往往需要数小时甚至数天才能得出结果,延迟了疫情控制的最佳时间窗口。

-设备依赖性强：PCR等方法需要热循环仪等昂贵的设备,特别是在偏远地区的养殖场,技术和设备的缺乏成为普及的障碍。

-操作复杂：需要专业的实验人员进行操作和数据分析,增加了检测的复杂性和成本。

-不可现场检测：大多数传统检测方法要求样本必须送至实验室进行分析，这样的操作流程延长了从采样到结果的时间。 

上述因素在重大疫情暴发时尤其明显，如非洲猪瘟的蔓延，传统的实验室检测往往无法及时应对，导致大范围的疫情扩散。

多酶恒温快速核酸扩增技术(MIRA)的原理与优势 

1.工作原理：MIRA(Multi-enzyme Isothermal Rapid Amplification)技术依靠多种功能蛋白在常温下协同作用,实现核酸的快速扩增, 是能够真正实现便携式的现场快速核酸检测技术。

2.与传统PCR相比的优势

-更快的检测速度：MIRA技术可以在5分钟至20分钟内完成扩增，相较于PCR的数小时反应时间，显著提高了检测效率。

-无需昂贵设备：MIRA技术在恒温下完成反应，不需要复杂的热循环仪，只需简单的恒温装置即可操作，适合现场检测和移动检测。

-操作简便：MIRA技术无需专业的实验操作技能，养殖场主和技术员经过简单培训即可使用，大大降低了人力成本。

-适应性强：MIRA技术可以在多种环境下进行检测，不受复杂实验室条件的限制，特别适合远程和资源有限的地区。

3.MIRA技术在病原体快速检测中的应用：通过对常见病原体的快速检测，MIRA技术可以在动物出现临床症状之前及时发现潜在的感染源，帮助养殖场主采取早期防控措施。尤其是在重大疫情如非洲猪瘟或布鲁氏菌病的爆发时，MIRA技术提供了一种便捷且高效的检测方式。

实验操作

-实验所需工具

-实验操作步骤

1.取出快速核酸释放剂（根据检测病毒所属DNA型/RNA型的不同，选择不同的释放剂）

2.将部分核酸释放剂，放入采样管中。

3.准备进行拭子采样（口腔、鼻腔......），口腔采样前2h，禁止入食。

4.在鼻腔/口腔处旋转10-20次，采样完毕后，将拭子头部折断，放入采样管中。

5.颠倒混匀，静置5min后，得到样本裂解液。

6.样本处理后，操作台进行消杀。

7.取出K8凯发国际生物成品检测试剂盒，试剂为全冻干体系（酶冻干＋buffer微球），如需液体buffer，需要按照试剂产品说明书进行配置。

8.剪下所需数量的冻干微球试剂反应管（常规为8连排；需要做阳性对照与阴性对照，管盖上进行标记）

9.打开管盖，加入样本裂解液。（可查看试剂复溶状态）

10.上下颠倒混匀8-10次，进行充分混匀

11.打开数字化恒温检测仪，开盖放入反应管，点击右侧开关，点击加热按钮。

12.运行4min响起提示音，取出试剂，再上下颠倒混匀8-10次，放入原方向原位置反应仓。

13.再次16min后扩增完成，查看结果。