人巨细胞病毒（HCMV）是疱疹病毒双耳疱疹病毒亚科的一员，主要传播途径是来自对婴儿呈HCMV血清阳性的母亲母乳。早产儿以及极低出生体重的婴儿，由于其免疫系统不成熟和缺乏来自母亲的保护性抗体，可能会遭受HCMV感染的严重后果。但母乳是婴儿推荐的营养来源，它也被认为是对早产儿的治疗方法。为了防止早产儿母乳获得性巨细胞病毒感染，确保VLBW婴儿尽快获得安全的母乳，一种快速、经济、简单的方法在母乳中进行HCMV检测对于预防获得性HCMV感染是至关重要和必要的。

中国医科大学法医学学院的姚军教授的课题组在《Frontiers in cellular and infection microbiology》期刊上发表文章《Rapid detection of human cytomegalovirus by multienzyme isothermal rapid amplification and lateral flow dipsticks》，影响因子4.6。研究采用多酶恒温快速核酸扩增技术MIRA和侧流色谱带LFD相结合，构建了一种有效的HCMV检测技术。在37°C恒温环境下，整个反应可以在12分钟内完成，10分钟后可以明显观察到LFD显色结果，且该方法的检测灵敏度达到50copies/μl。检测母乳样本，将MIRA-LFD方法和常规qPCR做对比，MIRA-LFD的准确率为100%。

研究概述

课题组开发了一种快速、有效、经济的HCMV检测方法可以预防早产儿获得性巨细胞病毒感染。课题组将MIRA与LFD结合起来，创造了一种新的HCMV检测方法，适用于家庭检测。

将母乳样本涡旋离心后，使用DNA快速释放剂从母乳样品中提取HCMV DNA。整个MIRA扩增反应可以在37°C恒温环境下经过12分钟完成。接着稀释产物，用LFD条带显色，10 min后可观察结果。

实验中使用了K8凯发国际生物的DNA恒温快速扩增试剂盒（胶体金检测条型）（产品货号：WLB8203KIT）、DNA恒温快速扩增试剂盒（基础型）（产品货号：WLB8201KIT）。

这种方法不需要精密的仪器或熟练的操作人员，可应用于医疗资源有限的区域或家庭，以减少早产儿HCMV感染引起的严重疾病，也可以使得早产儿、低体重儿早日开始母乳喂养。

实验结果

将HCMV质粒DNA连续稀释10倍，从5×10⁶copies/μl稀释到5copies/μl，然后使用MIRA-LFD检测样本。条带可以识别浓度低至50copies/μl的质粒DNA。并且观察到水和人类基因组模板没有扩增片段。

上图为使用MIRA-LFD检测HCMV质粒样本。1：水模板；2：人类基因组模板；3：5×10⁶copies/μl模板；4：5×10⁵copies/μl模板；5：5×10⁴copies/μl模板；6：5×10³copies/μl模板；7：5×10²copies/μl模板；8：5×10¹copies/μl模板。9:5copies/μl模板。

课题组使用qPCR对质粒一样地进行了10倍连续稀释的分析，从5×10⁶copies/μl到5copies/μl，检测限为5×10³copies/μl。结果表明，MIRA-LFD对HCMV的检测灵敏度高于qPCR。

上图为用qPCR方法检测HCMV质粒样本。1：5×10⁶copies/μl模板，2：5×10⁵copies/μl模板，3：5×10⁴copies/μl模板，4：5×10³copies/μl模板，5：5×10²copies/μl模板，6：5×10¹copies/μl模板，7：5copies/μl模板，8：水模板。